?。?)數據貯存和計算機控制系統
數據貯存采用列表排隊方式。利用計算機用多種圖形來(lái)表明各參數間的相互關(guān)系,以單參數直方圖,雙參數二維點(diǎn)圖,等高圖等方式顯示。數據分析一般設定正確的分析范圍,劃分計算區域和計算結果。
?。?)流動(dòng)系統
流動(dòng)系統是流式細胞儀的心臟,因為細胞懸液在被檢測之前必須首先形成一個(gè)很細的穩流,細胞在其內部排成單列通過(guò)測量區。細胞懸液和鞘液分別(是分別還是同時(shí))進(jìn)入流動(dòng)室,鞘液的作用是使樣品懸液中的粒子組成單一縱列方式通過(guò)測量區,保證每個(gè)細胞通過(guò)激光照射區的時(shí)間相等,從而得到準確的細胞熒光信息。
?。?)激光系統
多采用氬離子激光器。使發(fā)射光在可見(jiàn)光譜范圍內488nm激發(fā)。目前市場(chǎng)上大多數熒光色素適用于此波長(cháng)。激光的單色性好,功率高,穩定。
?。?)光學(xué)和電子系統
激光束射至經(jīng)流體力學(xué)聚焦的個(gè)別細胞和粒子后,光散射在各個(gè)方向(360°)發(fā)射。有兩個(gè)光散射參數需收集,前向角散射(FSC)主要用于檢測細胞體積的大小。另一為側向散射(SSC)用于檢測細胞膜,胞質(zhì),核膜等細胞內部結構及胞質(zhì)內顆粒。
熒光信號是由對細胞進(jìn)行染色的特異性熒光染料受到激光激發(fā)后發(fā)射的。熒光波長(cháng)與激光波長(cháng)不同,而且強度較弱,因此要使用光學(xué)濾片濾除非熒光信號并使用靈敏的檢測器。熒光測量時(shí)通常使用線(xiàn)性放大器(即放大器的輸出與輸入是線(xiàn)性關(guān)系),適用于較小范圍內變化的信號,如前向角散射和DNA測量。但有時(shí)需要對數放大器(即輸出與輸入是對數關(guān)系)。如果原來(lái)輸出為1,當輸入增加到原來(lái)的10倍時(shí),輸出是2。BD_FACSCalibur流式細胞儀在免疫學(xué)檢測中常使用對數放大器,因為在免疫學(xué)的樣品中,可能有的細胞未被染色而僅有自發(fā)熒光,為陰性群體;被染上色的細胞特異性熒光可能比自發(fā)熒光強數倍到數十倍,為陽(yáng)性群體。使用對數放大器可以同時(shí)分辨出亮度差異大的多個(gè)細胞亞群,容易選定不同亞群間的分界點(diǎn),有利于流式細胞儀的分析和分選。
熒光信號的補償:當用一種激光束同時(shí)激發(fā)兩種染料發(fā)射出兩種不同波長(cháng)的熒光時(shí),兩種熒光發(fā)射光譜有一定的重迭,可用電補償減去不適合熒光通道測定的重迭信號。
?。?)細胞分選系統
細胞分選可使被特定的細胞從細胞群體中分離出來(lái)。流式細胞儀所測定的任何參數都可以作為細胞分選依據,被選出來(lái)的細胞的均一性與所測參數有關(guān)。其工作原理是把液滴形成信號在壓電晶體上使之產(chǎn)生機械振動(dòng)(不太通順),液柱斷裂成一連串均勻的液滴,一部分液滴中包有細胞,如果其特性與被選定要進(jìn)行分選的細胞特性相符,則帶有特定的電荷。BD_FACSCalibur流式細胞儀帶有電荷的液滴向下落入偏轉板的高壓靜電場(chǎng)時(shí),偏轉落入特定的收集器內,完成細胞分類(lèi)收集的目的。